Pembukaan Grand Prix Italia dimulai dengan Marco Bezzecchi dan Aprilia menunjukkan performa impresif dengan waktu nol, setara dengan Pedro Acosta dan KTM-nya. Meskipun demikian, posisi pertama jatuh ke tangan pembalap Italia itu karena memiliki catatan waktu kedua yang sedikit lebih cepat. Sementara itu, Brad Binder, yang mengendarai KTM pabrikan lainnya, menempati posisi ketiga dengan selisih 0,053 detik dari dua besar. Pembalap lain juga menunjukkan performa bagus dengan sebagian besar menggunakan kombinasi ban depan lunak dan ban belakang medium, kecuali beberapa pembalap seperti Fabio Quartararo, Bezzecchi, dan Acosta yang beralih ke ban belakang keras selama sesi berlangsung.
Bezzecchi, yang mencoba memperbaiki performanya dengan menguji set aerodinamika baru di Aprilia-nya, mengalami sesi yang sedikit kacau dengan beberapa kali keluar lintasan dan kunjungan ke pit box untuk mengganti motor. Sementara itu, pembalap lain seperti Francesco Bagnaia dan Marc Marquez juga melakukan uji coba komponen baru pada motornya. Meski demikian, semua pembalap harus menyesuaikan diri dengan karakteristik lintasan yang memengaruhi strategi balap mereka.
Sesi latihan itu sendiri berlangsung dalam kondisi cuaca yang sangat panas dengan suhu lintasan mendekati 50 derajat Celsius. Meskipun demikian, hanya satu insiden terjadi saat Raul Fernandez terjatuh di awal sesi. Di luar lintasan, beberapa pembalap seperti Márquez, Quartararo, Acosta, dan Bagnaia juga mengalami masalah teknis yang mengganggu performa mereka. Pada akhir sesi, Fabio Di Giannantonio berhasil menempati posisi kelima tercepat, diikuti Quartararo dan Maverick Viñales. Sementara itu, Bagnaia hanya mampu menempati posisi kedelapan dengan selisih waktu yang cukup signifikan dari posisi teratas. Seluruh hasil FP1 MotoGP Italia 2025 menunjukkan persaingan ketat di kelas tertinggi balap motor ini dan menjanjikan balapan yang sengit di hari-hari mendatang.
